ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Студенты кафедры биохимии для исследовательской работы направляются в различные научно-исследовательские институты, а также могут заниматься в лабораториях кафедры. Моя работа проходит в лаборатории "Регуляция экспрессии генов" Института Цитологии РАН. Непосредственно моя научная деятельность не связана с животными и в основном мне приходится иметь дело с культурами клеток млекопитающих или бактериальных клеток. Большую же часть времени отводится на работу с еще более мелкими объектами - молекулами нуклеиновых кислот и белков. Исследования нашей группы связаны с изучением роли продукта гена ретинобластомы (pRb) в регуляции клеточного цикла. Большинство клеток на том или ином этапе своего развития претерпевают деление, т.е. проходят через фазы клеточного цикла. Впервые белок pRb был описан в связи с мутацией кодирующего его гена в трансформированных (т.е. ставших злокачественными) клетках сетчатки глаза. Именно с отсутствием данного белка связаны опухоли этой ткани (ретинобластомы), а также, как выяснилось впоследствии, и других тканей. Белок pRb экспрессируется у всех эукариотических организмов - от дрожжей до человека и у всех выполняет роль супрессора (негативного регулятора) клеточного цикла. Именно поэтому мы считаем, что изучение закономерностей в клеточном цикле, рассмотрение механизмов его регуляции и представляет собой очень важную и интересную область клеточной биологии. В своей научной работе мы используем самые разные инструменты и методы исследования - от световой микроскопии до радиоактивных изотопов. Находят применение также различные электрические приборы и вычислительные машины - от калькулятора до компьютеров. Непосредственно моя работа связана, как правило, с получением рекомбинантных молекул ДНК и последующим использования их в разнообразных целях. Необходимо отметить, что администрацией Института Цитологии предусмотрены правила безопасной работы с рекомбинантными молекулам ДНК. Эти правила включают меры безопасности и физические меры защиты. Меры безопасности слагаются из приемов стандартной микробиологической практики, физической и биологической защиты. В соответствии с правилами к работе с рекомбинантными ДНК допускаются лица, прошедшие медицинский осмотр и получившие подготовку, которая предусматривает знание основ биологии организмов, с которыми предстоит работать, и приемов работы с ними. Подготовка должна быть подтверждена документально. Физические меры защиты разделяются на несколько уровней. Минимальный уровень (Ф1) Эксперименты, требующие физической защиты первого уровня, могут проводится в лаборатории, предназначенной для работы с микроорганизмами ряда Escherichia (штамм E. Coli K-12) с помощью известных и общепринятых микробиологических методов. Работа проводится на открытых поверхностях без специального защитного оборудования. В лаборатории должна поддерживаться строгая чистота. Прием и хранение пищи, курение в этом помещении запрещены. Следует использовать для работы только механические пипетки. В лаборатории Ф1 проводят все эксперименты по клонированию фрагментов ДНК прокариотического и эукариотического направления. Низкий уровень (Ф2) Эксперименты, в которых необходима физическая защита вторго уровня, могут проводится в помещениях, подобных лаборатории Ф1, однако доступ посторонних лиц в лабораторию ограничивается. Автоклав (паровой стерилизатор) устанавливается в том же здании, где расположена лаборатория. Рекомендуется использование боксов с ламинарным потоком воздуха и другие устройства физической защиты, сводящие к минимуму опасность утечки материалов. Использованные в опыте материалы, содержащие микроорганизмы, обеззараживаются. Во время работы на двери лаборатории вывешивается знак биологической опасности. Применяются все приемы, обязательные для Ф1. В лаборатории Ф2 проводятся эксперименты по манипуляции с генами животных и человека, могущих нести потенциальную биологическую опасность (в том числе с онкогенами на основе клеток E. Coli K-12 и векторов типа pBR322, pUC и др.). Средний уровень (Ф3) Эксперименты, требующие физической защиты третьего уровня, проводятся в лаборатории, имеющей специальные инженерные конструкции и защитное оборудование, а также автономное оборудование: автоклав, СО2 инкубатор, центрифуги, термостаты. Лаборатория отделяется от других помещений дверями с блокировкой, обеспечивающими герметичность. Поверхности стен, полов, столов и потолков должны тщательно очищаться и деконтаминироваться. Внутри лаборатории создается отрицательное давление. Воздух из лаборатории поступает за ее пределы по самостоятельным воздуховодам после предварительной очистки на фильтрах. Работы, проводимые в лаборатории Ф3 включают эксперименты на клетках животных и человека, трансформированных онкогенами и ретровирусами, содержащими различные гены, в том числе онкогены. На дверях лаборатории, оборудовании и материалах устанавливается знак биологической опасности. Вход в лабораторию Ф3 разрешается только тем лицам, чье присутствие предусмотрено программой исследований и утверждено комиссией института по рекомбинантным ДНК. Работающие должны пользоваться средствами индивидуальной защиты в соответствии с нормами их бесплатной выдачи. Непосредственно после работы рабочие поверхности боксов и другого оборудования обеззараживаются, стеклянная посуда стерилизуется непосредственно в лаборатории. Высокий уровень Ф4 - в Институте Цитологии РАН не предусматривается.