DESALINIZAREA UNEI SOLUTII PROTEICE DIN ALBUS PRIN DIALIZA

Dializa este una din cele mai vechi tehnici folosite pentru indepartarea substantelor dizolvate cu masa moleculara mica cum ar fi sarurile dintr-un extract proteic.
Principiul metodei: Dializa unei solutii de albus de ou fata de apa distilata presupune trecerea ionilor de sare prin membrana sacului de dializa in mediul de dializa.Moleculele proteinelor raman in sacul de dializa deoarece datorita marimii lor nu pot strabate porii membranei de dializa.Insa, in acelasi timp cu desalinizarea are loc intrarea moleculelor de apa in sacul de dializa realizandu-se si o diluare a extractului proteic.
Aplicabilitatea metodei: Metoda poate fi folosita pentru schimbarea tamponului sau solventului in care este realizat extractul proteic, sau este folosita pentru indepartarea substantelor dizolvate cu masa moleculara mica cum ar fi sarurile dintr-un extract proteic.

Mod de lucru:

A.Prepararea solutiilor si a sacului de dializa

Se folosesc pentru dializa 7g din solutia proteica din albus preparata in lucrarea anterioara (Precipitarea proteinelor din albus de ou).
Pentru a prepara sacul de dializa , se taie din rola uscata o bucata cu un volum aproape dublu fata de volumul de extract ce urmeaza sa fie supus dializei.Se inmoaie aproximativ 15 minute in apa distilata, apoi se inoada la unul din capete.Se intoduce solutia de albus pregatita pentru dializa, se inoada si la capatul liber si se introduce in vasul de dializa in care s-a turnat in prealabil aproximativ 600mL de apa distilata.
In vederea realizarii reactiilor de identificare se prepara o solutie de sulfat de cupru 1% prin dizolvarea a 0.25g sulfat de cupru cristalizat in aproximativ 10mL de apa distilata si se completeaza la volum total de 25mL intr-un balon cotat.
In acelasi scop se realizeaza o solutie de hidroxid de sodiu in 40% prin dizolvarea a 10 g hidroxid de sodiu in aproximativ 10 mL apa distilata si se aduce la semn cu apa distilata intr-un balon cotat (25 mL).

B.Efectuarea dializei

Sacul de dializa cu extract proteic se imerseaza in apa distilata din vasul de dializa .
In vas este necesara agitarea pentru a facilita difuzia si a preveni crearea unor gradienti mari de concentratie.



Pe parcursul dializei se fac teste pentru Cl si SO4 :

Dupa 30 minute se iau 2mL din vasul de dializa intr-o eprubeta si se verifica prezenta anionului clorura prin adaugarea a 2-3 picaturi azotat de argint solutie 1% , aparitia unui precipitat de clorura de argint indica o reactie pozitiva.Intr-o alta eprubeta se verifica prezenta anionului sulfat cu clorura de bariu.rezulta sulfat de bariu insolubil.Operatia se repeta si dupa 60minute , schimbandu-se apa , si daca reactiile sunt pozitive se repeta reactiile si dupa 90 minute.
Dupa 30minute am avut reactii pozitive pentru ambii anioni ; dupa 60 minute am abtinut reactie pozitiva pentru ionul sulfat si negativa pentru ionul clorura ; dupa 90 minute am obtinut reactii negative.

Test pentru proteina: Reactia biuretului: cu sulfat de cupru in mediu alcalin rezulta o culoare albastru –violet (CuSO4 1% + NaOH 40%)
1) apa din vasul de dializa:
P1: 1mL apa din vasul de dializa +1mL NaOH +0.3 mL CuSO4 rezulta o culoare albastru aceeasi culoare obtinuta si in proba martor: M: 1mL NaOH+0.3 mL CuSO4+1mL apa distilata.
S-a masurat extinctiile la P1 si M si sau obtinut valori egale :EP1=EM=0.3nm
2) solutia salina proteica din care s-a pus in sac:
P2: 1mL NaOH+ 0.3 mL CuSO4+1mL solutie proteica rezulta o culoare mov
P3: : 1mL NaOH+ 0.3 mL CuSO4+0.9 apa distilata +0.1mL filtrat salin rezulta o culoare mov- albastru

La o concentratie mica de clorura de sodiu si la finalul dializei , se observa in sacul de dializa precipitare fractiei proteice a ovoglobulinelor.
Volumul din sac dupa terminarea dializei =8mL.


Dializa s-a realizat intr-un vas de dializa ca in urmatoarea figura:
-Na+Cl ,NH4 (SO4) ; -solutie proteica salina